TRAzol (R1021,R1022,R1023)
TRAzol (R1021,R1022,R1023)
El kit de purificación de ARN TRAzol proporciona un método simple, fiable y rápido para aislar ARN total de alta calidad de una amplia variedad de muestras, incluidas células y tejidos de animales y vegetales, bacterias y levaduras. El kit utiliza la fuerte capacidad de lisis del reactivo TRAzol. El reactivo TRAzol mantiene la integridad del ARN, al mismo tiempo que altera las células y disuelve los componentes celulares. La adición de cloroformo tras la centrifugación separa la solución en una fase acuosa y otra orgánica. El ARN permanece exclusivamente en la fase acuosa. Después de la transferencia de la fase acuosa, el ARN se recupera por precipitación con alcohol isopropílico. Después de la eliminación de la fase acuosa, el ADN y las proteínas de la muestra se pueden recuperar mediante precipitación secuencial. La precipitación con etanol produce ADN de la interfase, y una precipitación adicional con alcohol isopropílico produce proteínas de la fase orgánica. La copurificación del ADN puede ser útil para normalizar los rendimientos de ARN de una muestra a otra. El ARN total aislado por el reactivo TRAzol está libre de contaminación por proteínas y ADN. Puede usarse para análisis de transferencia Northern, hibridación de transferencia puntual, selección de poli (A), traducción in vitro, ensayo de protección de ARNasa y clonación molecular.
Contenido
| R1021 | R1022 | |
| TRAzol Reagent | 20 ml | 100 ml |
Reactivos que deben ser suministrados por los usuarios
- Cloroformo
- Alcohol isopropílico
- 75% de etanol (en agua tratada con DEPC)
- Agua tratada con DEPC
Almacenamiento
Almacenar a 2-8 ºC, proteger de la luz hasta 12 meses.
Notas
Precauciones para prevenir la contaminación por ARNasa
La ARNasa puede introducirse accidentalmente en la preparación de ARN en cualquier punto del procedimiento de aislamiento por errores técnicos. Debido a que la actividad de la ARNasa es difícil de inhibir, es esencial prevenir su introducción. Se deben observar las siguientes pautas al trabajar con ARN:
- Utilice siempre guantes desechables. La piel a menudo contiene bacterias y mohos que pueden contaminar una preparación de ARN y ser una fuente de ARNasa.
- Practique una buena técnica microbiológica para prevenir la contaminación microbiana.
- Utilice recipientes de plástico desechables estériles y pipetas automáticas reservadas para el trabajo con ARN para evitar la contaminación cruzada con ARNasas de equipos compartidos.
- En presencia del reactivo TRAzol, el ARN está protegido de la contaminación por ARNasa. El manejo posterior de muestras requiere que el material de vidrio o plástico no desechable esté libre de ARNasa. Los artículos de vidrio se pueden hornear a 150ºC durante 4h y los de plástico se pueden remojar durante 10 min en NaOH 0,5 M, enjuagar bien en agua y introducirlos en el autoclave.
Volumen recomendado de TRAzol en diferentes materiales de partida
| 10 cm² células adherentes | 1 ml |
| 107 células en suspensión | 1-2 ml |
| 100 μl leucocitos | 2 ml |
| 50-100 mg tejido normal | 1 ml |
| 50-100 mg tejido normal (hígado, bazo, hueso o cartílago) | 2 ml |
| 15-100 mg tejido vegetal | 1 ml |
Protocolo
| Cantidad | 20mL (R1021), 100mL (R1022), 1L (R1023) |
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